花卉组织培养技术

　　1、花卉组织培养的应用价值

　　花卉组织培养，就是分离花卉植物体的一部分，如茎类、茎段、叶、花、幼胚等，在无菌试管，并配合一定的营养、激素、温度、光照等条件，使其产生完整植株。由于其条件可以严格控制，生长迅速，1-2个月即为一个周期，因此在花卉植物的生产上有重要应用价值。

　　快速大量繁殖方面：对一些难繁殖的名贵品种花卉及一些短期内大量急需生产的花卉，应用很广。兰花、菊花、唐菖蒲等花卉利用腋芽增生，短期得到大量植株。非洲紫罗兰可通过叶片，水仙可通地鳞片，诱导产生不定芽，来达到大量繁殖的目的。

　　花卉育种方面：百合、鸢尾等许多花卉可以进行远缘杂交，由于生理代谢等方面的原因，常使杂种胚早期败育，因而得不到杂种植物。而在试管中进行胚培养，可使其顺利生长，得到远缘杂种。此外还可采用愈伤组织诱变、花粉培养等多种方法，来进行花卉育种。

　　培育无病毒苗方面：菊花、唐菖蒲、水仙、郁金香、大丽花等一大批花卉靠无性繁殖法繁殖，病毒逐代传递积累，危害日趋严重。而分离花卉植物0.1-0.5毫米大小的生长点，培养得到的基本上是无病毒苗。因此这一技术已在花卉无病毒苗的培育中广泛应用。

　　2、花卉组织培养对实验室及设备的要求

　　花卉组织培养是在人工控制的条件下培养花卉，是一种花卉现代工厂化生产新技术，所以其对实验室及设备有一定的要求。

　　实验室方面

　　①化学实验室：主要承担配制培养基的任务。要求具有各种化学药品试剂、各种玻璃器皿、称量天平等。

　　②洗涤室：主要进行玻璃器皿的洗涤，要求有自来水装置，同时有烘箱，以便洗后烘干。

　　③灭菌室：主要进行培养基和用具的消毒。要有高压灭菌锅，具有水源和电源。

　　④接种室：是花卉材料分离、消毒接种和转移的场所。要求密闭、清洁、整齐、装有紫外灯，能随时灭菌。有的也可用接种箱或超净工作台代替。

　　⑤培养室：是花卉材料培养生长的地方。要求清洁，保温好，室温均匀一致，并有绝热、防火性能。

　　设备方面

　　①天平：供配制培养基时称量药品和激素用。大量元素用普通天平；微量元素和激素用分析天平。

　　② 酸度计：测定培养基的pH用。

　　③高压灭菌锅：是供培养基和器械用具灭菌用。

　　④烘箱：洗净的玻璃器皿干燥灭菌用。

　　⑤蒸馏水制造装置：得到纯净水供培养用。

　　⑥冰箱：供贮放母液和植物材料用。

　　⑦接种箱或超净工作台：为植物材料接种或转移的操作场所。

　　⑧空调机：控制室温用。

　　3、花卉组织培养对培养基的要求

　　培养基是花卉植物组织培养中十分重要的基质，目前应用的有好多种，但其主要成分大体相同，主要成分是水，其他还有大量元素、微量元素、维生素、生长调节物质、蔗糖和琼脂等。

　　目前花卉组织培养中应用最多的为MS培养基。其组成是在配制1升（1000毫升）培养基时，加硝酸铵1.65克、硝酸钾1.9克、氯化钙0.44克、硫酸镁0.37克、磷酸二氢钾0.17克、碘化钾0.83毫克、硼酸5.2毫克、硫酸镁22.3毫克、硫酸锌3.6毫克、钼酸钠0.25毫克、硫酸铜0.025毫克、氯化钴0.025毫克、硫酸铁27.8毫克、蔗糖30克和琼脂7克。其他生长调节物质要根据花卉的种类和培养目的而确定。MS培养基中大量元素浓度过高，为此常采用1/2、1/4大量元素浓度作培养用，这样生长效果列好。

　　配制培养基前要准备好三角瓶、试管、烧杯、量筒、吸和等玻璃器皿，预先称好药品。配制时先将琼脂溶化，再加入在水中深解的各种营养元素和蔗糖，然后用氢氧化钠或盐酸调整培养基的pH，一般掌握在5.7左右。以后可分注到养瓶中，盖好瓶盖。培养基配好要经高压灭菌。冷却后放到培养室预培养3天，如没有杂菌污染，才可进行花卉材料的接种。

　　4、花卉组织培养的过程

　　花卉植物组织培养即无菌培养，也就是要求培养的材料不带有杂菌。从田间或温室等地切取花卉材料时，应选择健壮无病虫母株，取幼嫩、分生能力强的部位，以利生长。

　　取来的材料虽经选择，外部总还有不少杂菌。为此，接种前应进行表面灭菌。通常先用自来水冲洗十几分钟，有泥的应刷去。冲洗干净后，用70%的酒精浸泡10-15秒钟消毒。接着用无菌水（经高压灭菌的蒸馏水）冲洗两次，再用10%的漂白粉澄清液浸泡20分钟消毒，最后用无菌水冲洗3-4次。带有茸毛不易湿润消毒的材料可加些洗衣粉。上述操作皆应在接种箱或超净工作台等无菌环境条件进行。经过表面灭菌的材料，用无菌滤纸将水吸掉。再用解剖刀切取所需部位，通常几毫米大小，培育无病毒苗则应在1毫米以下，然后用解剖针或枪式镊子将材料接种到培养瓶上培养。工具用完即应在95%酒精中蘸一下，或用火焰消毒法消毒，避免工具带菌造成交叉污染。操作时应穿工作服、戴工作帽，事先洗净手，后再用酒精棉擦试一遍。