草莓脱毒苗的培育技术(草莓脱毒苗的育苗方法)

草莓极易感染病毒，草莓种苗生产系无性繁殖，感染病毒的母株会将病毒直接通过匍匐茎传递给子苗；蚜虫、蓟马、粉虱等刺吸式害虫也能传播病毒，导致病毒在草莓植株上不断地积累和蔓延。目前还没有防治病毒病发生的有效药剂，实现草莓无病毒栽培的唯一有效途径就是脱除草莓植株中的病毒，获得无病毒原种，而后以此大量繁育无病毒苗，不断满足生产的需要。

草莓感染病毒后通常不会死亡，但会造成生长势减弱，茎叶黄化，开花、结果数量减少，果实变小，成熟期推迟；严重时叶片皱缩、果实畸形、植株矮化，产量和品质大幅度下降。据调查，国内草莓产区病毒病非常普遍，带病毒株率达80%以上。

一、草莓脱毒方法

草莓脱毒通常有热处理、茎尖培养和花药培养3种方法。

1、热处理脱毒

在特定的高温条件下热处理草莓植株，使其体内的病毒被钝化，长出的新枝叶或新植株则可能不带有病毒。

2、茎尖培养脱毒

病毒在植株的各器官和组织中分布并不均匀，茎尖分生组织一般都不会感染或很少感染病毒。采用茎尖组织离体培养可以获得无病毒苗是目前草莓脱毒中应用最广的方法。

3、花药培养脱毒

在草莓现蕾期采集处于单核期的花药，经过诱导培养形成愈伤组织，再经过分化、增殖、生根培养，可以脱除病毒，获得无病毒苗。

二、草莓茎尖脱毒苗生产的基本程序

草莓茎尖脱毒苗生产的基本程序如上图。

三、茎尖培养技术

1、接种材料准备

（1）母株选择取样的母株可在生产田中挑选，选择结果性状好、品种种性纯正的植株作为母株，入选的植株要挂牌标记或单独种植，防止品种混杂。

（2）匍匐茎选取选取时间为5～6月，接种前选择母株发生的健壮匍匐茎，剪取长度为10～15cm，取样后要立即将匍匐茎基部插在盛水容器中，防止失水。

（3）匍匐茎前处理将田间匍匐茎除去不需要的部分，将所需部分切割至长度为5～8cm，置于自来水龙头下流水冲洗15分钟，用洗衣粉水（每5g洗衣粉兑100mL水）浸泡10分钟，再用自来水冲洗30分钟。

（4）匍匐茎消毒处理将经上述预处理、沥干水的匍匐茎放入广口瓶或烧杯，移至超净工作台，用70%乙醇灭菌10～30秒，再用0.1%氯化汞溶液灭菌10～15分钟或20%次氯酸钠溶液中8～10分钟，然后用无菌水清洗3～5遍，倒出、沥去最后一次清洗用水后备用。

2、培养基

草莓培养通常采用MS培养基，如上图。

（1）母液的配置

（2）培养基配置

以配置1000mL培养基为例，具体操作步骤如下：

①在1000mL的烧杯中先加入少量蒸馏水，分别添加母液Ⅰ20mL，母液Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ各10mL，母液Ⅴ5mL.

②加入蔗糖30g.

③根据用途培养基分为初代培养基、增殖培养基和生根培养基，要根据其不同用途、不同草莓品种对应添加不同种类的生长调节剂。

④用玻璃杯充分搅拌后，再用蒸馏水定容到1000mL.

⑤调节pH值至5.7～5.8.

⑥添加琼脂粉7～8g.

⑦加热至琼脂粉溶解后分装到试管或培养瓶中。

（3）培养基灭菌

分装完成后，将试管或培养瓶放入高压灭菌锅中，在温度121℃时，高压灭菌15分钟，灭菌结束后及时取出，冷却后放入无菌接种室中待用。

3、无菌操作步骤

①接种3天前用甲醛熏蒸接种室，接种前3小时打开紫外线灯进行杀菌。

②在接种前20分钟，打开超净工作台的风机以及台上的紫外线灯。

③接种员先洗净双手，换好专用实验服。

④上工作台后，用酒精棉球搽拭双手，然后搽拭工作台面。

⑤先用酒精棉球搽拭接种工具，再将镊子和剪刀从头至尾过火一遍，然后反复过火尖端处。

⑥接种时，接种人员双手不能离开工作台，不能说话、走动或咳嗽等。

⑦在接种过程中要经常灼烧接种器械，防止交叉污染。

⑧接种完毕后要清理干净工作台，用紫外线灯灭菌30分钟。

4、 初代培养

在无菌条件下，取已消毒的匍匐茎生长点0.2～0.5mm，接种到已灭菌的培养基上，1周左右茎尖转绿并萌动，20～30天形成芽丛。

5、继代培养

无菌条件下将已分化的芽丛切割，转入增殖培养基中进行增殖。45天后每个芽可获5～7个腋芽芽丛。

6、 生根培养

当增殖芽数量达到生产要求时，转入生根培养基中进行生根培养。生根时间为20～30天。

7、 驯化培养

当生根苗的根系长度达到1.5cm时，将瓶苗移到温室中，逐步开启培养瓶盖，驯化3～5天，然后将苗取出，清洗掉沾在根部的培养基，将苗定植于营养钵或穴盘中驯化培养。驯化培养条件：温度18～25℃，湿度85%～100%，遮阳网遮光50%，新根生出后去除遮阳网。待苗长出4～5片新叶时，就可以作为原种苗进行移栽种植。

四、病毒检测

对于每一个由茎尖组织产生的植株，必须经过检测无病毒，才能作为无病毒原原种繁殖。检验草莓苗是否脱除病毒的方法有PCR分子检测法和指示植物检测法。

指示植物检测法需要用UC1、UC5等指示植物，具体方法为：将指示植物和待检植株栽在小花盆中，并不断去掉指示植物发出的匍匐茎，使叶柄加粗。当叶柄达到2mm以上的粗度时，先从待检植株上剪取成熟叶片，剪去两边小叶，仅取中间一小叶带叶柄1.0～1.5cm，用锐利刀片把叶柄削成楔形作为接穗，然后选取健壮的指示植物，剪去中间小叶作为砧木，在两叶柄中间向下纵切1条长1.5～2cm的切口，再把待检接穗小叶片插入指示植物切口内。嫁接后为保证成活，用蜡质薄膜或塑料袋包扎嫁接口，每株指示植物可嫁接2个待检接穗。

嫁接后将整个指示植物的花盆套上塑料袋，以保证湿度。先在25℃的温度条件下非阳光直射处放置2～3天，然后移到25～28℃、光照充足的环境下，每隔2～3天换一次气，7～10天后去掉塑料袋，并开始分批去掉未嫁接叶片，促进幼叶发生，4～6周即可鉴定出有无病毒。一般每个待检植株要接种3株以上，根据指示植物症状表现，确定病毒种类和侵染程度。