养殖扩培菌种的方法(菌种扩大培养)

1. 菌种扩大培养

1.原因:在微生物发酵生产时,为保证足够的接种量,常采用菌种的扩大培养，常用的发酵工程有酵母菌、醋酸菌、毛霉、乳酸菌

2.果酒制作原理:在果酒的制作过程中，酵母菌前期进行有氧呼吸以增加菌种的数量，后期进行无氧呼吸产生酒精和二氧化碳。菌种来源→自然发酵:附着于葡萄皮上的野生型酵母菌，人工培养:分离获得的酵母菌菌种。

果醋制作原理:醋酸菌为好氧性细菌，其生长繁殖需要充足的氧气，在有氧和缺少糖源的条件下，可将乙醇氧化成醋酸，表达式为:C2H5OH+O2→酶CH3COOH+H2O

参与豆腐发酵的微生物有青霉、酵母、曲霉、毛霉等，其中起主要作用的是毛霉，毛霉等微生物产生的蛋白酶能将豆腐中的蛋白质分解成小分子的肽和氨基酸，脂肪酶可将脂肪分解成甘油和脂肪酸。

2. 菌种扩大培养的原理

生物反应工程通过生物反应学动力学，将传递过程原理、设备工程学、过程动态学及最优化原理的方法进行生物反应过程分析与开发。

生物反应学听起来并不陌生，研究生物反应原理。重点解决不同生物反应在不同形式的生物反应器中以不同的操作方式操作时的优化条件，内容包括：培养机制与灭菌，无菌空气的制备，菌种的扩大培养，反应器的设计与控制等等。所以我们不难看出生物反应工程是一门以生物学、化学、计算机等多种学科为基础交叉的工程。

3. 菌种扩大培养的目的

细菌可在固体培养基里形成单菌落,不易扩散,并且肉眼可见,易于挑取,简单方便；在液体培养基里容易扩散,肉眼无法分辨,难以挑取单菌落；显微操作繁琐耗时效率低；

固体培养基主要是为细提供表面附着和营养物质，分离大肠杆菌只需要做到分离，所以观察到就可以。而培养大肠杆菌的目的是培养增多，液体培养基增大了大肠杆菌与营养物质的接触面并且能容纳更多的大肠杆菌，使之更快生长。

4. 菌种扩大培养的工艺流程

1.醋酸菌斜面培养基：葡萄糖

 1克，酵母膏1克，碳酸钙

 1克，琼脂2.5克，水100毫升

2.斜面培养斜面制作：培养基按配方调配好（碳酸钙先不加入），分装试管，灭菌备用。碳酸钙按比例分装、灭菌。摆斜面前将培养基和碳酸钙混合，用手搓均匀，然后摆斜面，备用3. Acetobacter Medium (醋酸菌培养基) Glucose (葡萄糖) 100g Yeasst extract (酵母膏) 10g CaCO3 20g Agar (琼脂) 15g Distilled water (蒸馏水

 ) 1000ml Adjust (调) pH to 6.8 适用范围：恶臭醋酸杆菌混浊变种

3．1 斜面培养基葡萄糖8g，酵母粉

 10g碳酸钙5g琼脂15~20g水1000mLpH5.5，分装试管。0.IMPa灭菌20min。95％酒精(食用级)40mL。摆斜面，

3．2 液体增殖培养基葡萄糖10g 酵母粉10g pH5.5水1000mL灭菌后加入酒精(食用级)40mL 0.1MPa灭菌20min。

3．3 醋酸菌种的制备扩大培养过程：安瓿管

 ，液体试管1．液体试管2，100mL三角瓶，500mL三角瓶，1000mL三角瓶，种子罐。

3．3．1 安瓿管开启：酒精棉球擦抹三次，用重器撞击，打开，注入0.5mL无菌水，将菌球溶解，全部注入装有10mL液体培养基的18×180试管1内，30℃培养72h，每2h摇动—次

3．3．2 菌体生长：培养基变混浊后，颜色变浅，对光观察摇动时有云雾状金属光泽。每只装有10mL液体培养基的试管2接入lmL或0.5mL菌液，30℃培养48h，每2h摇动—次。

3．3．3 三角瓶三级扩培，三角瓶中培养基的装量为50％，每级按种量在10％左右，在转换振荡器上恒温培养，培养温度均为30℃，时间依次缩短为36、36、24h，

3．3．4 种子罐培养基同前 配料后种子罐夹套加热灭菌100℃保持15min，冷却后，先加入4％食用酒精

 ，无菌操作接入菌种。接种量为10％~12％，温度保持在30℃±1℃，通无菌空气，菌体生长时间为24~36h．视菌体生长情况及镜检结果而定

3．3．5 每次接种前，先将菌种进行外观观察 。有异样情况者，作涂片、染色、镜检观察，菌体生长不正常或染菌的三角瓶不得使用。外观正常者抽检2—3个样品，在确保菌株纯度、无污染的情况下转入下一级菌种扩培。培养醋酸菌时，需要用含糖或酵母膏（维生素B

 ）的培养基，在肉汤蛋白胨培养基上生长不良。大多数菌株可用六碳糖和甘油

 作为碳源

 ，对甘露醇

 和葡萄糖酸盐很少能利用或不能利用，不分解乳糖

 、糊精和淀粉。醋酸菌不形成芽孢，一般为形态近于球菌的短杆菌。醋酸菌可在PH4.3以下繁殖，增殖时多在液面成膜。幼龄细胞呈G-，老龄细胞呈可变性，因而染色只用来作为鉴定时的参考因素。

醋酸菌增殖时生成挥发性酸臭。感官判断类似于一种丁香成分，和纯醋酸的嗅感不同。防止方法不外呼改善工厂的环境卫生，加强卫生管理

5. 菌种扩大培养流程图

答:自然界里，食用菌都不是单独存在的，而是和许多细菌、放射菌、霉菌等生活在一起的。所谓菌种分离，就是把这些和食用菌一起生活的杂菌分离出来，通过培养，获得纯的优良菌种。菌种分母种、原种、栽培种。

(一)母种的分离培养

食用菌母种的分离，可分为孢子分离法、组织分离法以及基内菌丝分离等。

1.孢子分离法

孢子分离法，是用食用菌的有性孢子或无性孢子萌发成菌丝，培养成菌种的方法。这种菌种生活力较强，但孢子个体之间有差异，且自然分化现象较严重，变异大，需经出菇试验才能在生产上应用。

(l)单孢分离法：是每次或每支试管只取一个担孢子，

让它萌发成菌丝体来获得纯菌种的方法。蘑菇和草菇用单孢分离得到的菌丝，有结实能力，可采用此法分离生产纯菌种。单孢分离生产上较少采用，而且技术复杂，一般采用多孢分离法。

(2)多孢分离法：就是把许多孢子接种在同一培养基上，让它们萌发、自由交配来获得食用菌纯菌种的一种方法。具体操作方法，有以下几种：

①种菇孢子弹射法：选择个体健壮、朵形圆正，无病虫害、出菇均匀、高产稳产，适应性强的八九分成熟的种菇，切去大部分，菌柄用无菌水冲洗数遍后再用已灭菌的纱布或脱脂棉、滤纸吸干表面水分。在接种箱或无菌室内，把种菇的菌褶朝下用铁丝倒挂在玻璃漏斗下面，漏斗倒盖在培养皿上面;上端小孔用棉花塞住。培养皿放在一个铺有纱布的搪瓷盘上，静置12～20小时，菌褶上的孢子就会散落在培养皿内。形成一层粉末状孢子印(平菇极淡紫色，蘑菇、草菇

为褐色，香菇、金针菇孢子印白色)。用接种针沾取少量孢子在试管中的琼脂外面或培养皿上划线接种。待孢子萌发，生成菌落时，选孢子萌发早、长势好的菌落进行试管培养。

还可用孢子采集器收集孢子。方法是选好种菇后，按上述程序，轻轻掀开玻璃钟罩，将种菇柄朝下插在孢子采收器的钢丝架上，放在培养皿正中央。随即盖好玻璃罩，用纱布将钟掌周围塞好。并在纱布上倒少许升汞或无菌水。移入

20℃左右恒温箱培养。

②褶上涂抹法：按无菌操作分离时;应选择成熟的种菇，用接种针直接插入褶片之间，轻轻抹取褶片表面子实体尚未弹射的孢子，再在培养基上划线接种。

③钩悬法：取成熟菌盖的几片菌褶或一小块耳片(黑木耳、毛木耳、白木耳〕，用无菌不锈钢丝(或铁丝、棉线等其他悬挂材料)悬挂于三角瓶内的培养基的上方，勿使接触到培养基或四周瓶壁。置适宜温度下培养、转接即可。

④贴附法：按无菌操作将成熟的菌褶或耳片取一小块，

用溶化的琼脂培养基或阿拉伯胶、浆糊等贴附在配管斜面培养基正上方的试管壁上。经6～12小时的培养，待孢子落在斜面上，立即把孢子连同部分琼脂培养基移植到新的试管中培养即可。

孢子分离得到的母种、必须进一步提纯复壮，当母种定植一星期左右，菌丝布满斜面时，选择菌丝健壮、生长旺盛无老化、无感染杂茵的母种试管，进而转管扩大，一般到栽培种，转管不宜超过5次。

孢子分离得到的母种，必须通过出菇试验，鉴定为优质菌种后，才可供生产使用。

一般菌类如蘑菇、平菇、凤尾菇、香菇、冬菇和草菇等，都可用多孢分离法获得母种。

现就银耳孢子分离略述于下：

按无菌操作获取种耳后，悬挂种耳的三角瓶经12小时培养后，瓶底培养基表面就有"孢子印"。取出种耳，置

20℃—25℃温箱培养2～3天，培养基表面会出现乳白色透明的糊状小菌落，就是银耳的酵母状分生孢子形成的少量银耳菌丝。此时移接入试管斜面培养基上，待长满斜面后，再移接入营养丰富，且表面比较干燥的培养基上。经30天左右，菌落长出白色菌丝。

银耳的酵母状分生孢子、菌丝只有与羽毛状菌丝的子囊菌(香灰菌丝)混合培养时，由后者帮助分解木材及其他一些纤维物质，提供营养，才能利于银耳孢子萌发，菌丝的定植和子实体的形成。

在两种菌丝交会时，先选出两种纯菌丝。

羽毛状菌丝要纯化选育，一般要选取生长迅速，爬壁力强的试管斜面或种瓶，取先端菌丝，转管移接，置25℃—28℃上培养，重复转管几次即可得到优良纯种。

银耳菌丝的特点，菌丝生长缓慢，担孢子也不易萌发。在进行两菌混合时，先取经8～IO天培养的银耳菌丝斜面，按无菌操作方法在该斜面上距银耳菌丝约0.5厘米处接入一

小块羽毛状菌丝。置25℃下培养1周即得到混合好的银耳母种。

2.组织分离培养法

利用子实体内部组织，进行无性繁殖而获得母种的简便方法，即组织分离。该法操作简便，菌丝生长发育快，品种特性易保存下来，特别是杂交育种后，优良菌株用组织分离法能使遗传特性稳定下来。常采用以下分离方法。

(l)子实体分离：种菇要选朵大盖厚，柄短，八九分成熟的优良品种。切去菇两基部，在无菌箱内以0.1%的升汞水浸几分钟，再用无菌水冲洗并揩干或用75%酒精棉球擦拭菌盖与菌柄2次，进行表面消毒。接种时，只要将种菇撕开，在萌盖和菌柄交界处或菌褶处，挑取一小块组织;移接

到PDA培养基上。置25℃左右温度下培养3-5天，就可以看到组织上产生白色绒毛状菌丝，转管扩大即得到菌种。如香菇、平菇等可以用此方法。

(2)菌核分离：茯苓、猪苓、雷丸等菌的子实体不易采集。而常见的是它贮藏营养的菌核。用菌核分离，同样可以获得菌种。方法是将菌核表面洗净，用酒精或升汞消毒后，切开菌核，取中间组织一小块，约黄豆大小，接种在PDA

培养基斜面上，保温培养。应注意的是，菌核是贮藏器官，大部分是多糖类物质，只含有少量的菌丝，因此挑取的组织块要大一些，如果组织块过小，则不易分出菌种。

(3)菌素分离：有一部分子实体不易找到，也没有菌核，可以用菌素进行分离。如蜜环菌、假蜜环菌。其操作方法是先用酒精或升汞将菌素表面黑色皮层轻轻擦拭2～3次，

然后去掉黑色外皮层(菌鞘)，抽出白色菌髓部分;用无菌剪刀将菌髓剪一小段，接种在培养基上，保温培养，即得该菌菌种。

菌素分离要注意：因菌素比较细小，分离素也比较细小，分离时极易污染杂菌，所以要严格操作。

3.基内菌丝分离培养法

利用食用菌生育的基质作为分离材料，来得到纯菌种的一种方法，叫基内菌丝分离法。

此种分离方法是适宜只有在特定的季节才出现，而且是朝生暮死，不易采得的子实体。基内分离法与组织分离法不同之点是，干燥的菇木或耳木中的菌丝常呈休眠状态。接种后有时并不立刻恢复生长。因此，有必要保留较长的时间(约1个月)，以断定菌丝是否能成活。基内菌丝分离法又可分为，材中菌丝分离(即菇木或耳木分离法)及土中菌丝分离法等。

(1)材中菌丝分离法：就是菇木或耳木分离法，为了减少杂菌的感染，菇(耳)木在分离之前，必须进行无菌处理。可以把菇(耳)水表面用酒精灯火焰轻轻烧过，以烧死霉菌的孢子，或再用0.1%的升汞水浸孢几分钟，然后用无菌水冲洗后用无菌滤纸吸干。接种块切取时应注意。接种块必须在该菌菌丝分布的范围内切取。所以，菌丝生长缓慢的种类应浅取;菌种生长快的种类可以深取。同时。还应根据菇菌的种类、木材质地、菇(耳)木粗细、发育时间的长短来确定菌丝分布的范围。然后用一把利刀进行切取。接种块应尽量小些，以减少杂菌感染机会，提离菌种的纯度。接种块移到培养基上，就应该放到适合菌丝生长的22℃～26℃

的温室或温箱中培养，使菌丝恢复生长。

(2)土中菌丝分离：食用菌种类很多，许多土生的食用菌;孢子不易萌发。组织分离也不易成功，用土中菌丝分离获得纯种的方法，叫土中菌丝分离。

土中菌丝分离时要注意，由于土中菌丝体的周围生活着多种多样的土壤微生物，因此分离时必须尽可能避开这些微生物的干扰，尽可能批取清洁菌丝素的尖端、不带杂物的菌丝接种，反复用无菌水冲洗，在培养基中加入一些抑制细菌

生长的药物，如

40微克/升的链霉素或金霉素。如发现感染细菌，可以把菌落边缘的菌丝挑出来，接种到木屑培养基中。因细菌没有分解木质素的能力，因此在木屑培养基中不易扩展;只局限于接种处。待菌丝长出感染区后，就可以再进行扩大提纯了。

(3)子实体基部分离：从瓶栽、袋栽或大床栽培的子实体基部分离出新菌丝的方法，叫子实体基部分离，现以袋栽银耳为例说明：

从出耳早、出耳率离、无病虫害的栽培室中;选择生活力最强的幼耳5袋，移到气候温和，有散射光的野外场所进行后期培养，以增强菌丝体的生活力。经培养7～10天后，待子实体直径达4～5厘米时便可取回，作为分离的母体。再从中筛选最理想的一朵，用利刀割掉银耳子实体，放置于

0℃的冰箱或有敌敌畏的容器中过夜，以便杀死瓶中的害虫。然后用75%酒精或升汞擦洗耳基和袋子外边的杂质，连同接种工具、接种培养基等移进无菌室。经灭菌后，用接种刀把袋口上部约15毫米厚的老菌根挖除，并进行培养。待袋口露出白色菌丝时，用接种针挑取一块半粒米大的白色菌结体，迅速移入母种试管培养基的中央，轻轻地脱去接种针，

塞上棉塞。

为了能够获得较多的母种，一次接种量要有100—200支试管，以便从中选择。分离后应及时移入22℃—24℃恒温箱或温室中培养。由于培养基内水分较多，菌丝恢复要比耳木分离得快。经2-3天后，分离物的边缘就可看

到白色菌丝。每天要至少观察两次，以便提纯。观察、提纯方法与耳木分离法担同。经适温培养10-15天后，当接种块扭结团出现红、黄色水珠时，即可扩大原种。

(二)原种和栽培种的接种培养

母种获得以后，为了满足菌种生产的需要。应选出优良、纯度高的母种进一步扩大为原种。

原种培养基一般采用棉籽壳、木屑、草类等培养基。

瓶装或袋装的原种培养基灭菌后，可送入灭过菌的接种箱内，待瓶中的培养基冷至30℃以下，可按照无菌操作程序进行接种。

菌种瓶(袋)放入培养室时，要经常进行检查，一经发现杂菌污染，立即取出。培养成的原种，菌丝体必须健壮有力，紧贴瓶壁而不干缩，颜色纯正，具有一定清香味，生活力强，扩制成栽培种时吃料快。

栽培种就是将原种进一步扩大培养成三级种，它和原种的接种及培养相同。一般香菇、平菇、冬菇、猴头、木耳、银耳的栽培种多用锯木、棉皮作培养基。蘑菇多用粪草做培养料。

栽培种要求料块不脱水干缩。菌丝体健壮有力、颜色纯正，有清香味，无老化现象，无杂菌污染，有的种许可有少量原基，接入栽培料后，发菌快，长势好，生活力强。

原种在接栽培种时，原种瓶口的一层菌丝体应挖去不用。

(三)液体种的简单培养

目前，用液体深层发酵法生产菌种，具有生产量大、周期短、菌龄整齐、成本低廉、接种方便等特点，是实现食用菌工厂化生产的目标。现将液体种培育过程简述于后，供参考。

简言之就是将纯正优良的菌种，接入液体培养基(固体培养基不加凝固剂)，使菌丝繁殖形成大量小菌球，然后将这种培养基拌入木屑或棉籽皮料内，制成菌块、培养其形成子实体。还可用于制原种、栽培种。

培养液体菌种，可将培养液装入三角瓶中，约占空瓶的五分之一重量。用摇瓶机(也称摇床)来培养。摇瓶机有旋转式和往复式两种，一般多用往复式。液体培养基可用马铃薯汁(加糖)，麦芽汁配制，也可用玉米粉、豆饼粉、糖、无机盐等配制。可以混合培养基，因适用于多种食用菌和药用菌的培养，均有好效果。组分：豆饼粉2%，玉米粉1%，

葡萄糖3%，酵母粉0.5%，磷酸二氢钾0.1%，碳酸钙 0.2%， pH自然， 12℃灭菌半小时。然后接种培养。

如果生产量较大，在三角瓶的基础上，再逐级扩大种子缸，发酵罐中进行液体深层通气发酵，产生大量菌种。但由于生产中要求设备繁多，技术性强，我们还应创造条件;实现食用菌栽培的现代化。

(四)菌种质量的鉴定

菌种质量鉴定最好的方法是，做出菇试验。但是时间比较长。在购置菌种时，或在菌种生产中，如何能知菌丝生长情况，快速判断菌种质量?我们介绍几种方法：

1.肉眼观察：优良菌种菌丝浓白，绒状，粗壮密集，生长整齐，速度快，香味浓厚。

2.优良菌种标准可归纳为："纯、香、正、壮、润"五个字。检查时，打开瓶塞，从菌种瓶中部取出小块菌丝体，观察色泽，闻其气味，手捏料块检查其含水量，看是否符合上述要求标准。

3.显微镜检查：挑取少量菌丝，置显微镜上观察其形态，菌丝分枝，分隔情况，锁状联合，细胞膜的厚薄。

培养观察：从菌种瓶中挑取小块菌丝体，接种斜面试管培养基上，置23℃～25℃恒温中培养，经五周后检查菌种生活力。如果菌丝生长快，旺盛纯一，健壮浓厚，长且整齐，则表示菌种的生活力强。

4.分块法：在桌上放一张白纸，把菌龄相同的菌种从瓶内取出一大块，用手分成2块，再把2块分成4块，4块

分成8块，依次进行。优良菌种整块多，碎渣少。劣次菌整块少，碎渣多。

5.液体菌种鉴别：当三角瓶或发酵缸培养3-7天后，如液面出现气泡，产生"油皮"、混浊等现象，说明菌种本

身带有杂菌。如菌块上浮，或迟迟长出很薄的菌丝层，则说明菌种生活力弱。白块四周的菌丝生长快、浓白、棉絮状，表明菌种生命力强。

(五)菌种生产过程中的杂茵防治

在生产菌种时，要时刻注意杂菌污染，以防为主，一旦发生，根治很不容易。所以整个制种过程都必须在无菌条件下进行。接种箱及所有分离、接种的用具、器皿，都要进行严格的消毒灭菌。工作人员的双手要用消毒剂清洗，并穿戴消过毒的工作服、帽和口罩，动作要敏捷、准确，尽量不要讲话走动，以防空气中的杂菌感染。

分离母种时，选择出菇早、生活力强，第一潮菇是关键，因它生活力强，接种后迅速占领阵地，无杂菌侵入的机会。

被污染的菌种，原因是多方面的，一般是灭菌不彻底所致，或因接种时无菌操作不严、瓶盖不合适造成的。所以灭菌一定要彻底，最好在接种萌将培养基置25℃左右温箱中做效果检查，经2天不长杂菌，说明彻底，可以使用，接种过程中一定要严格无菌操作。

污染杂菌另一个原因可能是分离母种时感染杂菌，因种菇表面带菌，消毒不彻底，通过组织块将杂菌带入培养基。

总之，污染机会很多，要注意环境消毒，按无菌操作规程彻底灭菌，层层把关，环环抓紧，严加注意;提离菌种质量。

6. 发酵生产前什么要进行菌种扩大培养

1、固体表面发酵法：是把固体表面培养的菌泥与载体按比例混合经干燥制成。此法产量低，劳动强度大，易受杂菌污染，不适于工业化生产，投资少。

2、大罐液体发酵法：其工艺流程为，菌种接种培养→种子罐培养→生产罐培养→排放培养液加入适量载体→干燥→粉碎→过筛→质检→益生素产品。此法适于工业化生产，便于无菌操作，但成本高。

7. 菌种扩大培养的一般流程

1、首先，你需要买一些没有经过处理的小麦或者黑麦，甚至是玉米都可以。然后把一个咖啡过滤网罩在上面，盖上盖子。

2、浸泡之后，将麦子装进玻璃罐子，然后放进锅中煮沸20分钟杀菌。

3、煮过之后，放置冷却，然后从蘑菇菌柄上截下一段。

（无菌的没有经过污染的）

4、然后将取出来的部分菌柄部分放进玻璃罐中。

5、用咖啡过滤网，因为它们需要呼吸。

6、然后录你需要把这个罐子放到一个黑暗、湿润、凉爽的地方。

7、大概三周之后，罐子i就是这个样子，长满了白色的菌丝。

8、然后你就可以将这些转移到你要准备种植蘑菇的稻草捆上。

这样一罐菌种，可以接种 3个那样的种植袋，可以生产出很多的蘑菇。

2、将接种好的斜面放置在25℃下培养至菌丝爬满斜面。将此斜面菌种再转接几次斜面试管扩大培养后，得到的母种即可用于制作二级菌种即原种了。扩展资料：

1、营养：蘑菇是一种腐生真菌，完全依靠培养料中的营养物质来生长发育。

蘑菇可以利用的碳源有葡萄糖、蔗糖、麦芽糖，淀粉、维生素、半纤维素及木质素等，必须依靠其他微生物以及蘑菇菌菌丝分泌的酶将它们分解为简单的碳水化合物后，才能吸收利用。

8. 菌种扩大培养受哪些因素的影响

微生物用于食品制造是人类利用微生物的最早、最重要的一个方面，在我国已有数千年的历史。微生物在食品制造应用中特点：种类多、便于工业化生产、产量大可保证供应。缺点：一种微生物可同时产生多种酶，因此工序较复杂。

微生物在菌种的扩大培养就是把保藏的菌种，冷冻干燥管中处于休眠状态的生产菌种接入试管斜面活化，再经过扁瓶或药瓶和种子罐，逐级扩大培养后达到一定的数量和质量的纯种培养过程。这些纯种的培养物称为种子。特点：菌种细胞的生长活力强，接种后在发酵罐中能迅速生长；生理性状稳定；菌体总量和浓度能满足大容量发酵罐的要求；无杂菌污染不带杂菌；生产能力稳定。

9. 菌种扩大培养的方法

1)获取菌种

首先要分离和筛选获取生产菌种。菌种是牛肝菌人工种植的基础和保障，获取菌种，最初必须野外寻找标本，进行分离，然后纯化、筛选、驯化稳定、保存以及栽培出菇验证等，确认符合生产指标，再做进一步扩大生产。常规严格共生牛肝菌分离菌种比较困难，在人工培养基上生长缓慢，乃至不能生长，栽培难度极大。异样脉柄牛肝菌分离相对荣易，也荣易人工条件下出菇，因此，牛肝菌种植，目前以分离获取异样脉抦牛肝菌为主。当然，引进和商品子实体分离菌种，更为便捷。

适宜分离、转扩试管菌种培养基为，土豆200g、葡萄糖20g、硫酸镁1g、磷酸二氢钾1g、酵母膏2g、水1000ml。釆用组织或孢子分离均可获得纯菌种，28－30℃闭光培养。

(2)菌种的液体菌种扩大培养

牛肝菌菌种直接转扩固体培养基，表现生长慢，荣易污染等，目前生产上，采用液体扩大后转接，比较成功。釆用试管分离菌种培养基，去掉琼脂，三角瓶摇瓶，28℃暗光培养，根据选用品种，通常7－10d，即可使用。为满足生产需釆用液体罐进一步扩大培养，培养基同上。

(3)适合培养基及栽培容器

目前生产原料，主要以小麦、谷粒、高粱、木屑、米糠等，釆用17x33cm塑料袋或较大规格塑料瓶，每袋湿重0.9－1Kg，灭菌后冷却、接种，28－30℃培养，一般25－30d长满。

(4)覆土、培养

厚度5－6cm，28－30℃暗光培养，6－10d长满覆土层。

(5)出菇、釆收

温度28－30℃，光强300－400Lx，每袋或瓶成熟一个子实体，直径4cm左右、菌盖未完全平展时，即可釆收。历时约55-60d，每袋、瓶收鲜菇100-120g，转化率约25%。

5.讨论

(1)目前牛肝菌的人工栽培，仅限于异样脉柄牛肝菌，属弱共生菌，可以腐生生活，人工栽培成功，在于资源发现，而非菌根菌栽培上的突破。其它种类牛肝菌属严格共生菌，目前只能人工合成菌根，实现出菇。

(2)异样脉柄牛肝菌对营养要求严格，目前离不开以粮食为主料进行栽培，单产也不高，有待营养生理深入探究，降低成本。

(3)菌种保存、转接过程易出现退化，影响出菇，有待改良菌种，稳定种性，提高转化率。

(4)固体菌种转接培养料，生长慢，易污染，因此目前生产上釆用液体菌种转扩，原因有待探究和进一步改进。

(5)因目前技术仍存在一定难度和专利壁垒，以及品种等诸多原因，市场消费群体有待进一步扩展，一哄而上式发展，应该慎重，但极具有发展前景，是不容置疑的！

10. 菌种扩大培养用什么培养基

(1)食用菌麦粒培养基

小麦(或大麦、燕麦、玉米粒等)98%、石膏粉2%、ph值6.5-7.0。该培养基适用于大多数食用菌原种的生产。

(2)食用菌棉籽壳培养基

棉籽壳77%、麸皮20%、蔗糖l%、石膏粉1%、石灰1%．含水量65%左右。该培养基适宜于大多数食用菌菌种的生产。

(3)食用菌木屑麸皮培养基

阔叶树木屑77%、麸皮(或米糠)20%、蔗糖1%、石膏粉1%、石灰1%，含水量65%左右。该培养基适宜于木腐菌菌种的生产。

(4)食用菌玉米芯培养基

玉米芯77%、麸皮20%、蔗糖l%、石膏粉1%、石灰1%．含水量65%左右。该培养基适宜黑木耳、平菇菌种的生产。

(5)食用菌综合培养基

木屑20%、玉米芯20%、棉籽壳37%、麸皮15%、玉米粉3%、豆饼粉2%、石膏粉1%、蔗糖1%、石灰1%，含水量65%左右。该培养基适宜于大多数食用菌菌种的生产。